《同济博士论丛：拟南芥中RNA指导的DNA甲基化》刘海亮,祝建,朱健康【pdf】

内容简介:

DNA甲基化是一个保守的表观机理，在维持基因组稳定和器官发育方面起到非常重要的作用。

《拟南芥中RNA指导的DNA甲基化/同济博士论丛》通过实验得到了部分数据，通过筛选rosl的抑制子，确定了RDM1、RDM3、RDM4是RdDM受体复合体中的新成员，在连接与沉默复合体相关联的小RNA功能与先前存在或者重新胞嘧啶甲基化中起到至关重要的作用。

目录:

总序

论丛前言

前言

章 绪论

1．1 RNA指导的DNA甲基化

1．2 siRNA的产生

1．3 DNA甲基转移酶

1．3．1 MET1

1．3．2 CMT3

1．3．3 重新甲基化酶DRM及不对称甲基化

1．3．4 DNA甲基化复合体

第2章 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 方法

2．2．1 植物总DNA的提取（CTAB法）

2．2．2 植物总RNA提取（RNeasy Plant Mini Kit， QIAGEN）

2．2．3 cDNA合成（SuperScript．ⅢFirst-Strand Synthesis System， Invitrogen）

2．2．4 感受态的制备与转化

2．2．5 DNA的回收（离心柱型普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒QIAGEN）

2．2．6 RNA分析

2．2．7 DNA甲基化分析

2．2．8 6xHis-tagged蛋白质纯化（Ni – NTA Fast Start Kit，QIAGEN）

2．2．9 位点突变（QuikChange Site-Directed Mutagenesis Kit， Stratagene）

2．2．10 凝胶阻滞分析（Electrophoretic mobility shift assay，EMSA）

2．2．11 免疫共沉淀

2．2．12 免疫荧光法和显微镜

2．2．13 植物染色体蛋白的免疫染色

2．2．14 染色质免疫沉淀

第3章 结果与分析

3．1 通过筛选rosl的抑制子，确定了RDM1是转录基因沉默途径中的一个新成员

3．1．1 ROSl：植物中去甲基化酶的发现

……

第4章 RDM3和RDM4

第5章 结论与讨论